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推薦兩個來自2022年諾獎得主的實驗神器!

2022年10月13日 13:38:59來源:賽多利斯點擊量:3446

賽多利斯

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  【制藥網 產品資訊】瑞典皇家科學院10月5日宣布,將2022年諾貝爾化學獎授予科學家Carolyn R. Bertozzi、Morten Meldal和K. Barry Sharpless,以表彰他們在“點擊化學和生物正交化學”方面所做出的貢獻。
 
  CR. Bertozzi是第一個提出生物正交反應概念的人。生物正交反應是指在活體細胞或組織中,能夠在不干擾生物自身生化反應條件下可以進行的化學反應,是化學生物學中非常重要的工具。生物正交反應必須發生在復雜的生命條件下,與點擊反應一樣溫和且高效,且具有高選擇性。
 
  那么生物正交反應和近期火熱的免疫治療有什么關系呢?
 
  CR. Bertozzi課題組就用這種反應將唾液酸酶和一種抗體藥物(曲妥珠單抗)偶聯物T-Sia 2形成一種新的免疫檢查點抑制劑療法,并在《Nature》子刊上發表了題為Targeted glycan degradation potentiates the anticancer immune response in vivo [1]的文章(以下用“該文”表示)。
 
  唾液酸酶的作用
 
  唾液酸殘基(基本單糖結構單元之一)在腫瘤細胞中上調,與受體Siglecs結合可形成免疫抑制效果。而唾液酸酶可以除掉這些唾液酸,阻斷Siglecs-唾液酸的相互作用。
 
  抗體和唾液酸酶的偶聯方式就是著名的生物正交反應——具有張力的環狀炔與疊氮的無金屬催化的點擊反應。
 
  在偶聯抗體生成后仍需要面臨兩個問題:酶和抗體之間linker是否穩定?考慮到抗體需要有ADCC等效應來殺死腫瘤,修飾后的抗體是否還有Fc受體的結合活性?
 
  該文使用Sartorius的Incucyte® 實時活細胞分析系統 進行linker穩定性分析。
 
  用熒光基團標記不同linker(oxime或HIPS)偶聯抗體,可通過熒光強弱與熒光持續性判斷linker的穩定性。使用Incucyte® 進行活細胞實時成像,發現HIPS比較穩定,同時克服了抗體和酶之間先前使用的肟鍵的不穩定性。
 
  抗體和Fc受體的結合活性作為抗體藥物的重要表征方法,該文通過Octet® 非標記分子互作系統進行分析。發現偶聯后的抗體藥物(T-Sia2)與Fc受體的親和力與未偶聯的藥物類似。
 
  在制備一些對照蛋白的時候,也用到了Octet® 檢測其與Fc受體的親和力(數據未列出)。
 
  T-Sia 2在移植了同系HER2+癌細胞的小鼠模型中,作者觀察到腫瘤生長延遲,并且證明與腫瘤唾液酸減少有關。在動物試驗中也說明了這種方法的可行性。生物正交反應在活細胞成像、藥物可控靶向釋放、抗體藥物偶聯,甚至聚合物化學、材料表面化學領域均有應用,而該文就是在抗體藥物偶聯中的一個案例。
 
  CR. Bertozzi課題組在多篇文章中都使用了Incucyte® 實時活細胞分析系統和Octet® 非標記分子互作系統。好馬配好鞍,Octet® 和Incucyte® 不愧為2022年諾獎得主都在用的實驗神器!那為什么大家都爭先恐后的使用這兩款神器呢?
 
  使用Incucyte® 實時活細胞分析系統的優勢
 
  培養箱內可長達數周的連續觀察,最短幾分鐘間隔拍攝,減少人力,防止過多操作對細胞的傷害;如該文每隔2個小時拍攝,共拍攝4天。
 
  6個板位,分別獨立設置檢測程序,可以兼容各種孔板和培養皿,通量高;如該文有各種免疫抑制劑、效靶比等實驗組,Incucyte® 一次可以完成所有實驗組實驗。
 
  高效簡便的模塊化軟件設置和數據分析,輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標多參數;該文提到了使用Incucyte®多個參數的調節,使得結果更加準確。
 
  大于100種優化過的活細胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol,文章數大于12000篇。
 
  使用Octet® 非標記分子互作系統的優勢
 
  近年來,諸多諾貝爾獎獲得者都用到了Octet® 非標記分子互作系統作為實驗研究的重要工具:
 
  2021|諾貝爾獎得主教你用BLI技術“感知痛覺”!
 
  2020|諾獎獲得者教你做分子互作競爭實驗
 
  2020|告別EMSA,試試CRISPR女神用的核酸互作神器
 
  非標記Direct Binding是趨勢,它的結果更加準確。
 
  快速測定親和力,更加定量化對互作進行表征。
 
  無洗滌步驟,可測弱親和力(解離快);如該文Fc受體解離快,無法用帶洗滌的傳統方法建立結合活性檢測。
 
  測試時間短,一般10分鐘,更快拿到結果;如該文5分鐘就可以完成實驗。
 
  實驗形式多樣化:定性,兩者結合,協同/競爭實驗,垂釣。
 
  寫入美國藥典,文章>10000篇,認可度廣。
 
  萬金油技術,可以用與檢測DNA、小分子、蛋白等各種生物分子。
 
  使用方便,成本相對較低。
 
  再好的idea與成就,也需要用強有力的手段和工具去實現,Incucyte® 實時活細胞分析系統和Octet® 非標記分子互作系統,來自諾獎得主的制勝法寶!
 
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